細胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定的細胞。細胞庫是生物制藥的源頭，是重中之重，對于生產(chǎn)或檢定用細胞庫，各國監(jiān)管機構(gòu)一般要求三級管理，即原始細胞庫(PCB)、主細胞庫(MCB)和工作細胞庫(WCB)。PCB負責(zé)提供種子細胞，經(jīng)過不斷的克隆、篩選和鑒定后，形成MCB，再通過傳代擴增等過程，最終形成WCB，用于大規(guī)模的生物制品生產(chǎn)。如果穩(wěn)定表達細胞株或者商業(yè)化的細胞株為引進和購買的，也可以采用MCB和WCB組成的二級細胞庫管理。當(dāng)然，在某些特殊的情況下，也可以只選擇建立MCB一級細胞庫，但需經(jīng)過監(jiān)管機構(gòu)批準，足見其對細胞質(zhì)量和藥品安全的嚴格要求。
PCB的數(shù)量是根據(jù)實際來計算的，每個品種可能都不一樣，需要考慮后續(xù)生產(chǎn)、檢定需要、保藏年限，檢測用數(shù)量、復(fù)檢頻率等，MCB和WCB凍存多少數(shù)量，根據(jù)需要確定，需保證后續(xù)生產(chǎn)、檢定足夠，即遵循“夠用原則"。
細胞庫建庫流程
干細胞療法已被證明是一種很有前途的創(chuàng)新療法，其中，間充質(zhì)干細胞(MSC)憑借低免疫原性、高增殖潛力以及免疫調(diào)節(jié)等特性被廣泛應(yīng)用研究。根據(jù)最新文獻統(tǒng)計，截至2023年，全球已有一千多項注冊臨床試驗使用MSC療法，12種MSC療法獲得監(jiān)管機構(gòu)批準商業(yè)化。未來，間充質(zhì)干細胞將在更多疾病的治療中發(fā)揮重要作用。然而，MSC細胞的凍存卻非易事，成功建立可靠的MSC細胞庫往往需要處理好各種操作細節(jié)，此外，MSC在超低溫環(huán)境下，代謝活性和黏附能力出現(xiàn)降低，細胞膜和細胞骨架發(fā)生變化。更為常見的是，MSC 經(jīng)過超低溫凍存，基本上都存在細胞活率下降問題，這對臨床治療效果有一定影響。
MSC作為種子細胞或者工作細胞，細胞凍存是繞不開的步驟。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染，保證細胞在各個凍存管中均勻分布，保證復(fù)蘇細胞具有恒定而符合生產(chǎn)要求的活力，是細胞庫制備的三個基本要求。而目前國內(nèi)大部分生物制藥企業(yè)還是采用手動的方式來進行細胞灌裝，其存在細胞樣品與凍存液接觸時間長導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差使得細胞庫質(zhì)量差、大量的人工重復(fù)操作帶來的誤差以及染菌風(fēng)險等問題，為了節(jié)省建庫的時間、提高細胞的一致性、降低污染風(fēng)險、節(jié)省質(zhì)量控制的成本，需要一種可靠有效的細胞灌裝方法，本篇將為大家重點介紹高通量自動化灌裝MSC細胞的解決方案—艾貝泰AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)。對灌裝系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)感興趣的粉絲可點擊此鏈接：新品上市丨AbioFill V100全自動細胞灌裝系統(tǒng)
MSC細胞灌裝實驗內(nèi)容
1.實驗材料：
細胞：貼壁的間充質(zhì)干細胞(MSC)
凍存液：90%FBS+10%DMSO
凍存管：Corning 430659(2ml,Ex)
AO/PI染色液
程序凍存盒等
2.儀器設(shè)備：
灌裝系統(tǒng)：AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)
細胞質(zhì)量監(jiān)控：Countleader細胞計數(shù)儀FL1000
3.實驗參數(shù)：
灌注模式：開蓋-灌注-封蓋
灌注流速：350μL/s
灌注體積：1000μL
4.灌裝視頻：
5.結(jié)果分析與討論：
MSC細胞上機前用30mL凍存液重懸(50mL離心管體系)，灌裝前細胞留樣進行細胞計數(shù)，測得細胞活率為97.55%，細胞密度約1.15E6cells/mL。使用灌裝系統(tǒng)進行24支凍存管灌注，灌裝體積為1mL/管，灌裝后取樣對24支凍存管的細胞進行細胞計數(shù)，并使用程序降溫盒在-80℃凍存此24支細胞。凍存24h后，37℃水浴復(fù)蘇，進行細胞計數(shù)。
灌注前/后、復(fù)蘇后平均活率(左)與平均活細胞密度(右)柱狀圖(n=24)
灌注前/后、復(fù)蘇后平均活率與活細胞密度表(n=24)
經(jīng)統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)灌注前、后細胞活率與細胞濃度差異不大，復(fù)蘇后的細胞活率稍微有所下降，下降幅度約為3%，為可接受范圍?；盥氏陆悼赡芤驗楣嘌b后取樣計數(shù)過程使細胞在常溫凍存液內(nèi)時間過長導(dǎo)致，縮短操作時間可以有效避免此活率下降。
以上實驗證實，AbioFill V100全自動細胞灌裝系統(tǒng)能自動化、高效地灌裝MSC細胞，灌裝前后細胞質(zhì)量不受到影響，可以建立高質(zhì)量、均一性的MSC細胞庫，解決MSC細胞大規(guī)模凍存的工業(yè)化問題，促進細胞治療行業(yè)的良好發(fā)展。
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